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用乙?；贵w填料及HRP標記乙酰化抗體快速檢測和定量細胞總乙?；鞍?
一、IP-ELISA聯(lián)合方法原理及流程：
方法原理及流程說明：
1） 從實驗組和對照組組的細胞中分別取400微克粗蛋白，每組用10uL抗乙?；贵w瓊脂糖填料富集（IP）。
2） 結合于瓊脂糖填料上的的乙酰化蛋白每次用100微升0.1 M HCl，洗脫兩次。
3） 將洗脫液匯集在一起，用飽和碳酸鈉調(diào)節(jié)pH值至中性。
4） 然后取洗脫液100微升/孔包被于酶標板上，重復包被兩孔，在室溫下培養(yǎng)過夜。
5） 第二天用PBSt清洗板孔2次，用0.1%BSA inPBSt封閉板孔，孵育30分鐘，再用PBSt洗滌三次。
5） 在37℃下添加HRP標記的抗乙?；贵w（用0.1%BSA in PBSt稀釋到0.25 ug/mL）30分鐘。
6） 用PBSt清洗板孔4次，每孔加100微升TMB，培養(yǎng)30分鐘顯色。
7）每孔10 uL 2M 硫酸終止顯色。在450 nm處讀取吸光度。
8） 通過OD（處理）/OD（未處理）計算反應性乙?；鞍姿?。
實例1：分析用不同濃度的TSA處理12小時的細胞中的總乙酰化蛋白水平。即先用抗AcK瓊脂糖填料IP,再以ELISA方法用HRP標記的抗乙酰化抗體做檢測不同濃度TSA處理的細胞中，快速檢測出其蛋白質(zhì)乙?；黾舆_10倍。
二、IP-WB聯(lián)合方法高確定性檢測乙酰化蛋白
實例2：分別用HDAC抑制劑TSA處理5和15小時后，對MMRU細胞樣品中的乙酰化蛋白質(zhì)進行Western blot分析。即樣品先用抗乙?；嚢彼岘傊怯H和富集（IP），再用WB方法，加入HRP標記的抗乙酰化抗體進行檢測，快速得到高確定性的WB結果。
三、快速檢測乙酰化蛋白所用到的相關抗體試劑
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試劑中文名稱 |
試劑英文名稱 |
貨號 |
使用范圍 |
規(guī)格 |
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抗乙酰賴氨酸抗體瓊脂糖填料 |
ICP0388-2mg
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IP |
2mg |
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抗乙酰賴氨酸抗體瓊脂糖填料 |
ICP0388-5mg
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IP |
5mg |
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HRP標記抗乙酰賴氨酸抗體 |
ICP0381 |
ELISA, WB |
100ug
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FITC標記抗乙酰賴氨酸抗體 |
ICP0385 |
IF |
100ug
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生物素標記抗乙酰賴氨酸抗體 |
Acetyl Lysine Antibody, Biotin |
ICP0383 |
ELISA, WB，IHC |
100ug
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抗乙酰賴氨酸抗體（多克隆） |
Acetyl Lysine Antibody |
ICP0380 |
ELISA, WB，IHC,IF |
100ug
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抗乙酰賴氨酸抗體（單克隆） |
Acetyl Lysine Antibody，Mouse Monoclonal |
ICP0390 |
ELISA, WB，IHC,IF |
100ug
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乙?；鞍着悸?lián)物 |
Acetylated BSA |
ICP6090 |
ELISA，competitive inhibitor |
5mg |
